樹脂裝填使用后的停運儲存

樹脂裝填正常使用后，如因系統(tǒng)檢修或季節(jié)性停產等原因停用，需要對樹脂進行充分再生處理與水洗后，再進行密封保存（為防止樹脂長時間儲存而染菌，很多情況下會將樹脂保存于10%的N***鹽水中或10%的N*** + 2%的NaOH堿鹽水中）。

注水保存防失水

對于短時間儲存在樹脂柱內的樹脂，應對樹脂進行充分再生處理與水洗后，向柱內注入一定量的清潔去離子水對樹脂進行保存，須保持一定的液面層高度（液面層穩(wěn)定高于樹脂床層2cm以上）。

層析柱是凝膠層析技術中的主體，一般用玻璃管或有機玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外，直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，樹脂柱生產商，凝膠柱床必須有適宜的高度，樹脂柱廠家，分離度與柱高的平方根相關，但由于軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞，一般不超過1米。分族分離時用短柱，一般凝膠柱長20-30厘米，柱高與直徑的比較5:1─10:1，凝膠床體積為樣品溶液體積的4-10倍。 分級分離時柱高與直徑之線為20:1─100:1，常用凝膠柱有50×25厘米，樹脂柱，10×25厘米。濾板下的死體積應盡可能的小，如果支掌濾板下的死體積大，被分離組分之間重新混合的可能性就大，其結果是影響洗脫峰形，出現拖尾出象，降低分辯力。在分離時，死體積不能超過總床體積的1/1000。

關于層析柱裝柱、使用及相關注意事項

（1）、裝柱前要仔細看填料的使用說明書，每種填料都有自己的特性，以及特殊的裝柱方法，針對不同的空柱，也要注意方法可能不同；這一點非常重要：裝柱包括以后使用中不允許柱內進入氣泡（bubble free），柱頭事先也要排除氣泡。

（2）、填料要加水攪拌成均勻懸液，懸液濃度依填料而不同，一般70－85%，迅速倒入空柱內，或吸或壓，流速和具體步驟看說明書。

（3）、所有柱子盡量做到填料均勻，尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后，可用柱效測定的方法檢查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔板高度應是填料平均粒徑的2－4 倍，樹脂柱供應，在此范圍內越小越好。

（4）、選擇合適的泵，**是流速滿足要求，脈沖盡量小。柱塞泵。

（5）、準備上柱的液體應進行過濾，至少是0.45micrometre。

（6）、關于純化，**要考慮的是你的目標：純度、數量、速度、收率等等，再根據樣品的具體情況，尤其是目標蛋白的性質，確定純化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。*步先從大量或復雜樣品中將目標蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;，與主要雜質分離；再用高選擇性的層析去除絕大部分雜質；后精細純化，提供純度至設定目標。到實際工作中，不要死靠三步，也許一步也許四步或更多，具體情況具體分析。所謂%26ldquo;三步%26rdquo;只是一種思路而已。

（7）、至于測序，我想大概不到1mg 應該足夠了。