pcr儀溫度校準(zhǔn)裝置、***擴(kuò)增儀(PCR儀)測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)裝置

***擴(kuò)增儀(PCR儀)測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范
一、 PCR儀溫度校準(zhǔn)的項(xiàng)目及必要性
一個(gè)穩(wěn)定的溫度循環(huán)是成功實(shí)現(xiàn)PCR所必需的。其中溫度控制的動(dòng)、穩(wěn)態(tài)特性是影響PCR擴(kuò)增結(jié)果正確與否的***重要因素之一, 這包括溫度準(zhǔn)確性、升降溫速度、溫場(chǎng)均勻性、***大超調(diào)溫度。
（一）、溫度準(zhǔn)確性
溫度準(zhǔn)確性是PCR儀***重要的性能指標(biāo)，如溫度準(zhǔn)確性低可直接造成非特異性擴(kuò)增，甚至是錯(cuò)誤的擴(kuò)增結(jié)果，造成假陽(yáng)性和假陰性。
市場(chǎng)上各家廠商考核***擴(kuò)增儀（PCR儀）性能的主要指標(biāo)，一般廠家的企業(yè)指標(biāo)為&plu***n;0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度準(zhǔn)確度為&plu***n;0.3℃。故需對(duì)PCR儀控溫準(zhǔn)確度進(jìn)行測(cè)試。
    校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)平均溫度的計(jì)算公式為：I—參加檢測(cè)的溫度探頭序號(hào)；n—參加檢測(cè)的溫度探頭的數(shù)量
（二）、溫場(chǎng)均勻性
    由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導(dǎo)致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗(yàn)結(jié)果偏差。一般PCR儀邊緣點(diǎn)的溫度低于中間區(qū)域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標(biāo)。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定均勻性為&plu***n;0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度均勻度為&plu***n;0.3℃。
    校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，通過(guò)選取孔板中16個(gè)特殊反應(yīng)位置來(lái)測(cè)量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個(gè)探頭在同一時(shí)刻***大溫度與***小溫度的差值。均勻度計(jì)算公式為：tmax-tmin  （tmax =***大溫度；tmin =***小溫度）
（三）、升降溫速率
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)量的多少?zèng)Q定了PCR的效率。為了在短時(shí)間內(nèi)獲得盡可能多的產(chǎn)物，需要儀器在升降溫段具有按照預(yù)設(shè)升降溫速率快速升溫和降溫的能力（***大升溫速率達(dá)15~20℃）。一個(gè)完整的PCR過(guò)程，是由若干個(gè)升溫→恒溫→降溫循環(huán)構(gòu)成的。因?yàn)?ldquo;變性”，“退火”和“延伸”3個(gè)階段是必須要保證的。因此，只有使升降溫的過(guò)程盡可能地迅速，才能縮短每個(gè)PCR循環(huán)以及整個(gè)PCR 過(guò)程所需時(shí)間。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定升溫速率為&plu***n;3℃/sec。
儀器校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時(shí)間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時(shí)間。
（四）、***大超調(diào)溫度
    當(dāng)溫度從一定點(diǎn)溫度調(diào)節(jié)到另一定點(diǎn)溫度,就會(huì)產(chǎn)生溫度的超調(diào)。超調(diào)溫度過(guò)大同樣會(huì)對(duì)試驗(yàn)產(chǎn)生影響，所以校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要計(jì)算***大超調(diào)溫度和平均超調(diào)溫度。