嘔吐***（Deoxynivalenol）ELISA檢測***盒
（貨號：MD200）
特別提醒：本***盒有兩種標準液，MAIZE嘔吐***標準液用于測定玉米占比大的樣品，其他樣品采用嘔吐***標準液，如果同時檢測大量不同種類樣品（包括玉米），采用嘔吐***標準液。
本***盒用于定量檢測樣本中嘔吐***殘留。
檢測樣本：谷物、飼料
樣本前處理：
-谷物（玉米、小麥）和飼料：研磨、***-水溶液提取、過濾、稀釋（可選）；
-硬質小麥：研磨、水提取、離心、稀釋
分析時間：20分鐘（不包括樣本前處理時間）
檢測限：
-玉米、小麥和飼料：0.04ppm
-硬質小麥：0.12ppm
特異性：交叉反應率（%）
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分析物 |
交叉反應率 |
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3-乙酰-嘔吐*** |
>100 |
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嘔吐*** |
100 |
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15-乙酰-嘔吐*** |
2 |
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3-葡萄糖基-嘔吐*** |
64+/-16 |
- 檢測原理
本***盒在預包被特異性嘔吐******的微孔內(nèi)進行。將酶標嘔吐***和標準品或樣本在預混合孔混合后轉移到包被嘔吐******的微孔，***次孵育時，標準溶液或樣本中的嘔吐***和酶標嘔吐***競爭微孔上的嘔吐******結合位點，洗板除掉所有未結合的酶標嘔吐***或自由嘔吐***分子。然后加入一定量顯色底物反應以檢測酶活性。加終止液終止反應，450nm波長***檢測，標準品或樣品中的嘔吐***濃度與吸收光強度成反比。
2.***盒組成
微孔板：96孔，預包被嘔吐******。板條可拆開單獨使用。
預混合板：空白，未包被***。
MAIZE嘔吐***標準溶液：5瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppm，0.04 ppm，0.25ppm，1.25 ppm，5 ppm。
嘔吐***標準溶液：5瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppm，0.04 ppm，0.25ppm，1.25 ppm，5 ppm。
酶偶聯(lián)物：1瓶，14ml。
10X濃縮洗液：1瓶，50ml。
顯色液：1瓶，15ml。
終止液：1瓶，9ml。
3.需要使用但***盒不提供的***和設備
-天平
-***（小麥、玉米、飼料）
-蒸餾水或去離子水
- N***（小麥、玉米、飼料）
-研磨器
-搖床（可選）
-離心機或濾紙
-恒溫箱
-氮吹儀
-20-200μl、100-1000μl移液器及吸頭
-20-300μl多道移液器及吸頭
-含450nm波長的***
4.注意事項
-僅用于體外檢測。
-一些***內(nèi)含防腐劑；終止液內(nèi)含有***，具有腐蝕性；酶偶聯(lián)物對身體***。
-小心操作，避免***接觸皮膚、眼睛和粘膜。
5.操作和存儲說明
-2-8°C冷藏保存，切勿冷凍。
-將未用完的板條用***盒提供的鋁箔袋重新密封。
-切勿使用過期產(chǎn)品。
-不同批次***盒內(nèi)的成分不能混用。
-請使用***盒內(nèi)提供的說明書。
6.樣本前處理步驟
6.1小麥、玉米和飼料
-將樣本混合均勻并充分研磨；
-稱取50g研磨樣本，并加入10g N***，再加入250ml 70%***溶液。可選方案：稱取5g研磨樣本，并加入1g N***，再加入25ml 70%***溶液。
-充分振蕩3分鐘。
-過濾樣本并收集濾液。用于檢測的樣本濃度范圍應為0.04-5ppm。
-如果樣本濃度>5ppm，用70%***溶液將樣本稀釋5倍，使?jié)舛确秶鸀?.2-25ppm。
建議樣本的稱取量為50g，以得到更好結果。
6.2硬質小麥
-將樣本混合均勻并充分研磨；
-稱取50g研磨樣本，加入10g純氯化鈉，再加入250ml70%***溶液；可選方案：稱取5g研磨樣本，加入1g氯化鈉后再加入25ml 70%***溶液。
-充分搖晃15分鐘。注意：建議用手搖晃或溫和提取系統(tǒng)。也可以使用磁力攪拌器、振蕩器或攪拌機，但結果會偏高。
-過濾樣本并收集濾液。注意：過濾過程會很慢，建議過濾前讓樣本先沉淀。作為可選方法，建議在3500g離心力下離心5分鐘，收集上清液。
-用100%***將上清液稀釋3倍（1+2）（例如：100μl上清液+200μl 100%***）。用于檢測的樣本濃度范圍應為0.12-15ppm。
-如果樣本濃度>5ppm，用70%***溶液將樣本稀釋5倍，使?jié)舛确秶鸀?.6-75ppm。
建議樣本的稱取量為50g，以使得到更具代表性的樣本。
7．工作溶液準備
嘔吐***標準品：即用；
酶偶聯(lián)物：即用；
洗液：用蒸餾水1：10稀釋（1+9）。注意：如果出現(xiàn)結晶，將溶液置于室溫并攪拌直至結晶完全溶解。
稀釋后的洗液在室溫放置24小時內(nèi)有效，2-8°C放置兩周內(nèi)有效。
顯色液：即用。顯色液對光敏感，應避免光直射，避光保存。
終止液：即用。
8.檢測步驟
8.1檢測前注意事項
-檢測前將所有***室溫放置1小時；
-使用后立即將所有***放置于2-8°C；
-不得改變檢測程序；
-不得延長或縮短孵育時間；
-孵育溫度不得高于25°C或低于18°C；
-孵育過程中不得晃動酶標板；
-使用精準的移液器及吸頭；
-一旦開始實驗，不要間斷地完成所有步驟，不要讓微孔干透；
-ELISA方法結果的再現(xiàn)性很大程度取決于洗板過程的效率和一致性，要按照介紹的程序洗板；
-為避免交叉污染，加不同樣品和標準品時要更換移液器吸頭；
-不得讓吸頭接觸到微孔內(nèi)的液體或者微孔內(nèi)表面；
-孵育時要避免光直射。建議孵育時用封板膜封板。
8.2檢測步驟
1.計算需要用到的微孔數(shù)量，標記***大光吸收值孔、標準品孔和樣本孔的位置。注意要考慮到都要做重復。取出需要的板條，并將未使用的板條重新用鋁箔袋密封。準備同等數(shù)量的預混合板條。
2.每個預混合孔加100μl酶偶聯(lián)物。
3.將標準品、樣本加50μl到對應預混合孔。標準品和樣本溶液含高濃度***，因此加入微孔前用移液器將溶液反復吹打幾次。
4.用移液器將預混合孔內(nèi)溶液混勻（上下吹打3次），并立即吸取100μl到對應包被嘔吐******的微孔。注意：吸取不同微孔溶液時，要更換吸頭以避免交叉污染。
5.室溫孵育10分鐘。不得延長孵育時間，孵育時不要晃動微孔板。
6.洗板順序
-孵育后，倒掉孔內(nèi)液體；
-將微孔加滿工作濃度洗滌液，然后倒掉洗滌液；
-用力上下在吸水紙上拍板，將微孔內(nèi)液體完全拍干。
重復洗滌過程3次。
在干凈的吸水紙上拍板，拍干微孔內(nèi)的液體。但不可使微孔干透。
7.顯色：用多道移液器加100μl顯色液到微孔，來回晃動數(shù)秒鐘。
8.室溫避光孵育10分鐘。
9.用多道移液器加50μl終止液到各孔。來回晃動數(shù)秒鐘充分混勻。
10.在1小時內(nèi)，用***450nm波長讀數(shù)。
9. 計算結果
-計算標準品和樣品的平均吸光值；
-用計算得到的平均吸光值分別除以0標準品的吸光值并乘以100；
標準品的吸光度值（或樣品）
---------------------------- X100= (%)吸光度值
0標準的吸光度值 (Bo )
-以標準品濃度值（ng/ml）的半對數(shù)值為橫坐標，B/B0值為縱坐標繪制標準曲線；
-將樣本的B/B0值帶入校準曲線，得到相應的濃度值；
-要得到樣本中嘔吐***的濃度值，還需要將從校準曲線讀到的濃度乘以相應樣本的稀釋倍數(shù)。
-小麥、玉米和飼料：由于標準品濃度已經(jīng)考慮了樣本稀釋倍數(shù)，從標準曲線讀到的濃度值即為樣本中嘔吐***的濃度。
-硬質小麥：稀釋倍數(shù)為3。
-所有樣本：如果提取過程中進一步稀釋5倍以得到更大濃度范圍，則結果需要再乘以稀釋倍數(shù)5.
10．樣品標準曲線示例
11.結果評價
計算出結果后，還需要驗證檢測效果。通過將得到的結果和說明書提供的技術參數(shù)比較驗證。如果結果與參數(shù)不符，請檢測***盒的有效期、讀取吸光值使用的波長、以及操作過程是否正確。如果不是操作錯誤，請聯(lián)系我們的技術支持。
12.***盒參數(shù)
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描述 |
參數(shù) |
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平均Bo吸光度 |
≥0.7 OD450nm |
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B/Bo 50% |
0.06-0.5ng/ml |
13．免責聲明
出現(xiàn)陽性結果時，必須用確證方法對樣本檢測。TECNA公司不承擔任何因為使用者錯誤使用***盒造成的損失。
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供應霉菌******盒 |
******B1 |
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******M1 |
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玉米赤霉烯酮 |
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T2*** |
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赭曲霉*** |
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伏馬*** |