熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）是在20世紀80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎上發(fā)展起來的一種非性分子細胞遺傳技術(shù)，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導分子（reporter molecule）結(jié)合，雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料[1，2].FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、***、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).

染色體原位雜交實驗的基本原理是利用特定標記的已知堿基序列的核酸探針，依據(jù)堿基互補配對原理，與中期染色體玻片標本中的同源 DNA 序列進行雜交。

標記可以用放1射性同位素（3H、35S、32P），然后進行放1射自顯影；也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛，再用熒光顯微鏡進行觀察，提供酵母雙雜交技術(shù)服務，即熒光原位雜交（fluorescent in situhybridization，F(xiàn)ISH）技術(shù)。

應用于分子病理診斷的DNA測序技術(shù)有直接測序法和焦磷酸測序法。直接測序技術(shù)主要是Sanger等發(fā)明的雙脫氧鏈末端終止法。其原理就是根據(jù)核苷酸在某一固定的點開始，隨機在某一個特定的堿基處終止，產(chǎn)生A、T、C、G4組不同長度的一系列核苷酸，然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進行檢測，從而獲得DNA序列。直接測序法是***突變檢測的“金標準”，其優(yōu)點是結(jié)果準確，重復性好，可檢測整個測序范圍內(nèi)已知和未知突變點;缺點是步驟多，耗時長，靈敏度低，過程不易控制，在檢測已知突變位點方面將逐漸被熒光定量PCＲ法替代。



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